ВЫЯВЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ В МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ СИСТЕМАХ

Смесь антигенов, содержащая антиген, специфический для данной системы, «фильтруется» через гетерологичную антисыворотку, содержащую антитела ко всем антигенам, кроме специфического. Выявление антигенов, прошедших сквозь фильтр, проводится с помощью гомологичной антисыворотки. Полнота фильтрации контролируется проявлением иммунофореграммы антисывороткой, взятой в качестве фильтра.

Поскольку в этом варианте метода проводится иммунопрояв-ление, наличие в агаровой пластинке белков фильтра, особенно иммунологически инертных, не влияет на формирование линий преципитации. Поэтому в качестве фильтра может быть использована цельная антисыворотка, а не ее у-глобулиновая фракция.

Технику метода и получаемые с его помощью результаты мы проиллюстрируем на примере обнаружения специфического af-глобулина в сыворотке крысиных эмбрионов взятых на поздней стадии беременности.

Сыворотку эмбриона «профильтровывали» через кроличью антисыворотку к сыворотке взрослых крыс (анти-ВС). Результаты фильтрации контролировали гомологичной и гетерологичной сыворотками. В качестве гомологичной антисыворотки использовали сыворотку кролика, иммунизированного сывороткой новорожденных крысят (анти-НС).

На первом этапе иммунофильтрации проводят включение «фильтра» в агаровую пластинку. Для этого, как показано на 81, /, в агаровой пластинке с помощью штампа пробивают прямоугольный резервуар F размером 4x6 мм. У анодного края резервуара помещают луночку (Р) для пиронина. Резервуар F заполняют гетерологичной сывороткой, используемой в качестве фильтра. Сыворотка должна быть предварительно тщательно отдиализована против буфера ионной силы 0,025, т. е. того же буфера, на котором приготовлен агар. Полюса располагаются, как показано на 81, /. Когда пиронин выйдет за катодный край резервуара, то у-глобулин сыворотки будет включен в агаровую пластинку (81, //). Если по условиям опыта необходимо установить двойной фильтр, то жидкость из резервуара F отсасывают и заполняют его вновь той же сывороткой. Снова вносят пиронин в лунку Р и проводят повторное включение у-глобулина в агар. После включения фильтра в агар приступают к собственно иммунофильтрации. Жидкость из резервуара F отсасывают и резервуар заливают расплавленным агаром. Против зоны расположения фильтра выбивают резервуар (о) для антигена и точно такой же резервуар располагают в участке чистого агара (81, //). Полюса переключают и проводят электрофорез в обратном направлении до того, как пиронин вернется в исходное положение. При этом все белки сыворотки, включая т-глобулин фильтра, вернутся в зону F. Проявление антигенов проводят обычным образом (81, ///) с помощью гетерологич-ной (1) и гомологичной (2) антисывороток. В контроле проявляются все антигены, имеющиеся в анализируемом препарате, а в «профильтрованном» образце только те, которые не реагируют с гетерологичной сывороткой и, следовательно, не задерживаются «фильтром».

На 82 представлены результаты анализа, проведенного по описанной методике. Видно, что один из компонентов сыворотки (af ) свободно проходит сквозь «фильтр», в то время как остальные антигены полностью задерживаются анти-ВС. Антиген, прошедший сквозь фильтр, совершенно не реагирует с анти-ВС.

Таким образом, метод аналитической иммунофильтрации позволяет проводить как бы «истощение» сложной смеси антигенов, оставляя на иммунофореграмме только антиген, специфический для данной системы.

Аналогичная техника применялась для обнаружения cxf в сыворотках мышиных эмбрионов и новорожденных мышей, а также в экстрактах мышиной гепатомы 22а и в сыворотках взрослых мышей с гепатомой 22а.

http://medicadverts.ru/ - медицинские советы Марии Струбциновой